备课素材：ELISE的四种类型--高二上学期生物人教版选择性必修1
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酶联免疫吸附测定，简称ELISA，是免疫学当中的经典试验，是将可溶性的抗原或者是抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合，进行免疫反应的定性和定量检测方法。
定性检测结果是判断受检标本中是否含有待检测抗原或抗体，做出有或无的简单回答，分别用阴性、阳性表示，阳性表示该标本在该检测系统当中有反应，阴性表示无反应，定量检测操作步骤复杂，影响反应的因素较多。
基本方法有：直接法、间接法、双抗体夹心法和抗原竞争法。
一、直接ELISA
原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。
优点：操作流程简短，实验步骤少；无需使用二抗，避免了交叉反应；实验步骤少，操作不易出错。
缺点：实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。
二、间接法ELISA
原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。
优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直标一抗，可保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。
缺点：交叉反应几率升高。
三、双抗夹心法ELISA
原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。
双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。
优点：高特异性，使用的捕获抗体与检测抗体都是检测特异性的；适用于复杂样品，抗原不需要进行纯化即可用于检测；灵活性更大，灵敏度更高，可采用直接法也可采用间接法。
缺点：检测物需要拥有两个以上不同的抗原表位或多个相同的重复表位；不适用于检测小分子物质。
四、竞争ELISA
原理：竞争法ELISA最为复杂，通常用于检测小分子如半抗原、激素、药物等。样品中待检游离抗原与固定于固相载体上的抗原一起竞争相同的有限量抗体，当样品中的游离抗原越多，就可结合越多的抗体，而固相抗原只能结合较少的抗体。反之亦然。经洗涤去除样品中的抗原与抗体的结合物，只留下固相抗原与抗体的结合物。显示经计算可得样品中抗原的含量。竞争法可根据实验设置直接法、间接法或夹心法形式。
例1、ELISA检测方法中，关于竞争法下列哪种说法正确
A、只用于检测抗原
B、只用于检测抗体
C、待测管的颜色比参照管的淡表示被检测物量少
D、被检测物含量高，则酶标记物被结合的机会少
答案:D
例2、新型冠状病毒的检测方法目前主要有核酸检测法和抗体检测法。下列说法错误的是（ ）
A.抗体检测法利用了抗原与抗体特异性结合的原理
B.感染早期，会出现能检测出核酸而检测不出抗体的情况
C.患者康复后，会出现能检测出抗体而检测不出核酸的情况
D.感染该病毒但无症状者，因其体内不能产生抗体不适用抗体检测法检测
答案: D
抗体只能与特定抗原结合，所以抗体检测法就利用了抗原与抗体特异性结合的原理，A正确；体液免疫需要经过一段时间才会产生抗体，所以感染早期会出现能检测出核酸而检测不出抗体的情况，B正确；机体通过产生较多的抗体从而将新冠病毒彻底消灭，故患者康复后，会出现能检测出抗体而检测不出核酸的情况，C正确；感染该病毒的部分人由于其机体自身免疫力强而未出现症状，但其仍发生相关免疫反应，故其体内也能产生抗体，D错误。
